为了有系统地进行幼儿教育的实验工作，陈鹤琴于1923年在自家寓所创办了南京鼓楼幼稚园，建立了我国最早的幼儿教育实验中心。他和张宗麟先生以及幼稚园的其他教师一起，进行了为期四年的一系列实验，对幼稚园办园的宗旨、培养目标、儿童应养成的知识技能及习惯，到幼稚园的课程、德智体美教育、玩具教具、设备标准、对教师的要求等方面进行系统的研究和总结，最后写成《我们的主张》(共15条)一文，于1927年发表在他主编的《幼稚教育》发刊词中。此外，还制订了《幼稚生应有的习惯和技能表》(共139条)。此两文全面地回答了应当怎样办中国化、科学化的幼稚园，提出办园方针、基本原则和具体经验，为办幼稚园提供了可资遵循的标准和依据。在此期间，他还和张宗麟一道支持陶行知创办燕子矶幼稚园，开辟了我国第一所乡村幼稚教育实验基地，把我国的幼稚教育办到乡村。
陈鹤琴一贯主张“开创儿童教育事业要有更多的人去实地研究”“非群策群力不可”“推敲切磋，真理才出，科学进步，端在合作”。20世纪20年代他发起组织了“幼稚教育研究会”,后又在此基础上成立了“中华儿童教育社”,该社到30年代发展到全国各地，成为当时全国最大的儿童教育学术团体。他还主编《幼稚教育》《儿童教育》《小学教师》《活教育》等教育刊物以及多种丛书、读物，并通过组织学术团体和办刊物，提倡研究风气，宣传交流研究成果，提高队伍的素质，推进幼教工作。